Vad är ett blodprov för ELISA

Utvecklingen av modern medicin i diagnosvärlden upphör aldrig att förvåna med sina prestationer, och nu behöver läkaren inte göra antaganden om den troliga diagnosen, och förlitar sig bara på indirekta tecken. Skapandet och introduktionen i laboratorievärlden av den enzymbundna immunosorbentanalysen (ELISA) gör att du snabbt och noggrant kan bestämma inte bara förekomsten av patogenen utan också många andra egenskaper hos sjukdomen.

Historia om skapande och utveckling av IFA

Denna metod för blodprovning började användas i praktisk medicin redan i mitten av förra seklet - någonstans på 60-talet. Dess ursprungliga mål var vetenskaplig forskning inom histologi, som var begränsad till sökandet och studien av den cellulära antigena strukturen hos biologiska arter. Blodtestet med ELISA är baserat på interaktionen mellan besläktade antigener (AG) och specifika antikroppar (AT), med bildandet av ett "antigen-antikropp" -komplex, bestämt av enzymet.

Detta fenomen fick forskare att bestämma att metoden kan användas för att känna igen proteinföreningar av olika klasser som bildas i blodserum när en patogen kommer in i kroppen. På grund av deras direkta engagemang i immunsystemets funktion kallas dessa föreningar immunglobuliner (Ig, Ig), och upptäckten var det största genombrottet inom laboratoriediagnostik..

Samtidigt började denna mycket känsliga metod endast användas aktivt på 80-talet, och den var endast tillgänglig i högspecialiserade medicinska institutioner. De allra första kunde använda enzymimmunanalysanalysatorer på stationer och blodtransfusionscentra, könsorgan och smittsamma medicinska institutioner. Detta berodde på den snabba spridningen av "1900-talets pest" - AIDS, och akuta diagnostiska och terapeutiska åtgärder krävdes..

Möjligheter för tekniken

Användningsområdet för blodprovet för ELISA är ganska brett - för närvarande är det omöjligt att föreställa sig hur komplicerad sökandet efter orsaken till många sjukdomar skulle vara. Sådan forskning används nu i nästan alla medicinska områden, även inom onkologi. Även om det är svårt för oinformerade att förstå, i vissa fall, efter att ha utfört det, var det möjligt att rädda patienternas liv, efter att ha upptäckt en tumör i de tidiga stadierna..

I moderna diagnostiska centra representeras laboratorieundersökningar inte bara av tumörmarkörer - de är utrustade med en imponerande arsenal av paneler för att utföra denna diagnos. Med deras hjälp är det möjligt att bestämma många patologiska tillstånd, såsom hormonella abnormiteter och infektiösa processer av olika ursprung..

Dessutom kommer genomförande och avkodning av ett ELISA-blodprov att göra det möjligt att spåra effekten av läkemedel på kroppen hos en sjuk person och till och med ett djur. Det senare används i stor utsträckning i veterinärkliniker, vilket hjälper till att bibehålla hälsan hos våra husdjur eller försörjare, vilket ger en stabil leverans av kött, mejeriprodukter och ägg som inte kan ersättas i kosten..

Så, som ett resultat av att endast ta några milliliter venöst blod och dess diagnos med ELISA-metoden, kommer läkaren, efter att ha beskrivit forskningsmaterialet, att kunna bestämma:

  • hormonellt tillstånd, inklusive biologiskt aktiva substanser i könsorganen och sköldkörteln, såväl som binjurarna;
  • förekomsten av bakterie- och virusinfektioner (hepatit B och C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkulos, myko- och ureaplasmos, HIV, TORCH) och andra sjukdomar av denna art;
  • tecken på vital aktivitet hos patogener i den patologiska processen, som slutade i återhämtning och passerade in i antikroppsbildningsstadiet (immunsvar).

Sådana komplex är mycket lättare att känna igen och eliminera av immunceller. Återstående effekter i form av antikroppar finns i flera fall i blodet för livet, vilket praktiskt taget minskar riskerna för återinfektion till noll.

Varianter av immunglobuliner

Det finns flera typer av antikroppar, och var och en av dem är involverade i immunsvaret i ett visst skede. Exempelvis är immunglobuliner av klass M (IgM) de första som bildas som svar på inträde av högt blodtryck i kroppen. Deras högsta andel observeras under de första dagarna av sjukdomen..

Sedan lanserar immunsystemet klass G Ig (IgG) i plasma, som är ansvariga för fullständig förstörelse av antigener och patientens återhämtning. Senare fortsätter de att vara i blodet och förbereder därmed immuniteten för en upprepad träff av en identisk patogen. Så här fungerar vaccination. Med införandet av försvagade antigener från patologiska mikroorganismer dyker många immunglobuliner upp och förblir cirkulerande i plasma.

Och därefter, om patogen kontakt uppstår, hanterar de snabbt infektionen och räddar kroppen från hälsorisker. IgA koncentreras i stora mängder i slemhinnorna, vilket blockerar inträde av patogena virus och bakterier i kroppen. IgE är ansvariga för att döda parasitinfektioner, och det finns många andra immunglobuliner involverade i immunsvaret.

Huvudobjekten av intresse för laboratoriediagnostik är Ig-klasserna M, G och A. På grund av koncentrationsnivån kan du bestämma sjukdomsstadiet och ta reda på vilka smittsamma sjukdomar en person har haft i sitt liv. Du kan till exempel kontrollera om det fanns en historia av vattkoppor eller röda hund. För att ta reda på om en viss typ av AT eller AH finns i patientens kropp eller koncentrationen av något hormon behöver läkaren inte förskriva flera laboratorieundersökningar - det räcker att skriva en remiss för ELISA.

Kärnan i tekniken

En enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter och andra mikroorganismer - skadedjur av kroppens hälsa gör det möjligt att inte bara fastställa förekomsten av patogener utan också berätta om deras antal i patientens blodplasma. Således möjliggör en sådan studie både kvalitativ och kvantitativ analys av patogena mikroorganismer som finns i serumet..

Patogenens koncentrationsnivå påverkar signifikant utvecklingen av infektion och återhämtningshastigheten, därför anses en kvalitativ bedömning inte vara mindre viktig än en kvantitativ. Hon ges långt ifrån den sista rollen i behandlingen av barn och vuxna. Men hur kan det hända att ELISA kan känna igen ett så stort antal mikroorganismer som parasiterar människors och djurs kropp, orsakar skada och minskar livskvaliteten??

Forskningsmetoden bygger på flera alternativ (direkt och indirekt - konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig) för att utföra de tilldelade uppgifterna, som alla är avsedda för specifika ändamål. Detta tillvägagångssätt möjliggör en riktad sökning och på kortast möjliga tid att identifiera orsaken till en viss patologi. För detektion av Ig av olika klasskategorier används en 96-brunnars platta (polystyrenpanel) och sorberade rekombinanta proteiner finns i dess brunnar. De spelar rollen som antigener och är i början i den fasta fasen.

När det kommer in i brunnen med blodplasma identifierar antigener eller antikroppar föremålet i samband med deras orientering och bildar ett komplex (AG - AT). Denna bildning fixeras av en enzymatisk förening (konjugat), som därefter kommer att manifestera sig som en förändrad färgning av brunnen. ELISA produceras på specifika testsystem tillverkade i specialiserade laboratorier och utrustade med en komplett uppsättning reagenser.

Denna analys kan utföras på brickor - brickor och spektrofotometeravläsningar, men de kräver manuellt arbete. Naturligtvis är det flera gånger bekvämare och snabbare för en laboratorieassistent att utföra alla manipulationer på helt automatiserade enheter. Vid användning av dem frigörs laboratoriepersonal från en stor mängd monoton aktivitet - tvätt, instillning och resten av rutinen, men inte alla medicinska institutioner har råd med så dyr utrustning

Tolkning av forskningsmaterial är uteslutande kompetensen hos en laboratoriediagnostiker - bara han kan få veta resultaten om detaljerna och finesserna i sjukdomsförloppet. I detta fall måste läkaren ta hänsyn till möjligheten att få falska negativa eller falska positiva svar..

Avkodning av material

Resultatet av en högkvalitativ enzymimmunanalys bör vara en entydig slutsats om den önskade mikroorganismen hittades eller inte i detta blodprov. Kvantitativ analys kommer att indikera koncentrationsnivån och kan uttryckas på två sätt - genom värde i antal eller med antalet "+" tecken.

Analyserade indikatorer

Under forskningen genomförs en noggrann studie av de viktigaste immunglobulinerna som är involverade i immunsvaret, såsom:

  • IgM - detektion av denna klass betyder utveckling av en akut form av en infektionssjukdom. Ett negativt resultat i sökandet efter IgM kan vara både bevis på frånvaron av den önskade patogenen och övergången av sjukdomen till en kronisk kurs.
  • IgA - bestämning av denna klass i frånvaro av IgM i de flesta fall, en signal om en kronisk eller latent form av utveckling av en infektiös sjukdom.
  • IgM och IgA (samtidig närvaro) - positiva resultat för båda typerna indikerar toppen av den akuta formen av patologi.
  • IgG - dess närvaro indikerar omvandlingen av sjukdomen till en kronisk form eller återhämtning och bildandet av immunitet mot det bestämda medlet.

Framväxten och ackumuleringen av en viss klass av IS sker vid olika tidssteg. Så, till exempel, uppträder IgM först, cirka 5 dagar efter att patogenen träffar. IG förblir i blodet i cirka 5-6 veckor och försvinner sedan gradvis. För närvarande är de tillgängliga för bestämning av ELISA. Cirka 3-4 veckor efter sjukdomsdebut uppträder IgG, som därefter kan stanna i flera månader. Men i analysen finns de inte alltid.

IgA bildas i blodet under 2-4 veckor, medan 20% av dem finns i serumet och 80% i utsöndringen av slemhinnorna. Dessa immunglobuliner försvinner som regel inom 2-9 veckor, vilket indikerar förstörelsen av patogenen och patientens återhämtning. Om ELISA fortfarande visar närvaron av IgA, signalerar detta processens övergång till en kronisk form..

Analysalternativ

Beroende på de mottagna uppgifterna kan ELISA-svar utfärdas på ett formulär i form av en tabell med en fullständig lista över alla AT och AG och en indikation på en positiv eller negativ reaktion. I vissa situationer visas ett kvantitativt värde - ett kraftigt positivt, positivt, svagt positivt eller negativt resultat. Det andra alternativet anger mängden antikroppar som ingår i det studerade blodprovet.

Förutom ovanstående värden undersöks en annan kvantitativ parameter i ELISA-processen - AT-aviditetsindex, beräknat i procent. Det visar hur länge sjukdomen varar - det vill säga ju högre indikator desto mer tid utvecklas patologin.

Alternativ ELISA-metod

En enzymimmunanalys är en ganska känd och vanlig diagnos. Kanske har vissa aldrig hört talas om det, men det finns en annan version av denna studie som är ännu mindre känd för ett stort antal människor, där ett prov av icke-blod tas. Denna teknik kallas analys av avföring för ockult blod, och i många fall gör det att du kan undvika ytterligare ansträngande procedurer, som också åtföljs av obehagliga känslor..

Ett ELISA-test för ockult blod (hemoglobinmolekyler) gör det möjligt att upptäcka blödning i matsmältningssystemet, till och med obetydlig, vars tecken i patientens avföring, som de säger, inte kan hittas med blotta ögat. En enzymbunden immunosorbentanalys i human avföring på kort tid kan visa magsår, polypos, divertikulos, tumörer som inte åtföljs av vissa symtom i de tidiga stadierna.

Hittills har tusentals varianter av enzymimmunanalystestsystem skapats som ger möjlighet att hitta AT och AG i en enorm lista med patologier. Därför används denna analys i nästan alla läkemedelsgrenar, för alla åldersgrupper. Och den absoluta ofarligheten gör att du kan tillgripa det både under graviditeten och för diagnos av försvagade patienter.

ELISA-analys: vad är det? varför behövs det? fördelar och nackdelar med metoden

ELISA-analys - vad är det? Det fullständiga namnet på denna diagnostiska metod kallas en enzymbunden immunosorbentanalys, och den baseras på bestämningen i perifert blod av antikroppar i olika klasser, eller immunglobuliner, som produceras av människokroppen..

I läkarutövandet tar ELISA-analysen en mycket viktig plats när det är nödvändigt att diagnostisera smittsam patologi. Denna analys visar inte bara förekomsten av en smittsam sjukdom utan också scenen i den patologiska processen. Inte bara i förhållande till patogenen är ELISA-metoden indikerad för användning: den används för att diagnostisera allergiska tillstånd. Detta test gör att du kan identifiera problem i immunsystemet, i många sjukdomar i det hematopoietiska systemet, autoimmuna och andra störningar.

Varför behövs IFA?

Alla forskare är benägna att tro att namnet "antikropp" är för olyckligt. Ändå speglar det en viktig egenskap hos immunglobuliner: de kan binda och neutralisera skadliga ämnen och närma sig dem som en "nyckel" till ett "lås". Mängden antikroppar i blodet återspeglar inte bara kroppens allmänna förmåga att skydda mot infektioner utan också förmågan att bilda cirkulerande immunkomplex som kan uppstå vid olika autoimmuna sjukdomar, till exempel med reumatoid artrit eller ankyloserande spondylit..

Komplex av antikroppar med ett antigen (en skadlig faktor av infektiös natur) är resultatet av kroppens svar på införandet av "outsiders". Därför lär sig immunsystemet att känna igen dem, med hjälp av lymfocyter, det tränar immunkompetenta celler, och de kan producera mycket specifika antikroppar. Så, antikroppar mot Epstein-viruset är ordnat annorlunda än antikroppar mot viral hepatit C, eller mot E. coli, och anti-HAV, eller antikroppar mot hepatit A-virus - annorlunda än autoantikroppar mot broskvävnad. Det är den höga specificiteten och överensstämmelsen mellan immunglobuliner och ett infektiöst medel som gör ett högt värde för sådan laboratorieforskning som ett enzymimmunanalys.

Efter en stark anslutning av antikroppar och antigener till ett enda komplex (antigen-antikropp) förlorar skadliga faktorer sin förmåga att skada kroppens vävnader, och sedan neutraliseras dessa komplex eller lyseras av fagocytos av neutrofiler och, "smälter", lämnar kroppen.

Ett ELISA-blodprov kan visa vilken specifik patogen faktor vår kropp står inför, i vilket skede är processen för interaktion mellan kroppen och infektionen. Efter studien kan läkaren göra en prognos med hög grad av självförtroende, ordinera vissa typer av behandling och i vissa fall till och med bestämma patientens förväntade livslängd, särskilt vid kroniska virusinfektioner, till exempel vid viral hepatit C.

Men i vissa fall finns det inga smittämnen i kroppen alls, och antikroppar "av misstag" attackerar sina egna organ och vävnader, eftersom immunkompetenta celler fick falsk information. Sådana sjukdomar kallas autoimmun, och ett enzymimmunanalys hjälper också till att känna igen denna kroniska patologi och hjälpa till med diagnos.

Mer om immunglobuliner

Totalt producerar människokroppen 5 kända klasser av antikroppar, vilka betecknas Ig (som står för immunglobuliner), som tillhör klass A, M, G, E och D. Alla är av stor vikt vid tolkningen av resultaten av ELISA-analys. Naturligtvis finns det mycket mer komplex, och inte alla är fortfarande öppna. Men vid diagnosen av olika sjukdomar är de tre första typerna av antikroppar mest värdefulla. Ett blodprov för ELISA använder så mycket information som möjligt: ​​det ögonblick som antikropparna dyker upp i blodet, förändringen i deras koncentration beroende på tid, försvinnandetiden samt typen av specifika antikroppar.

Så, deltagarna i den primära, akuta infektiösa processen är immunglobuliner i klass M, som alltid indikerar en akut fas, även om sjukdomen raderas kliniskt. Ett typiskt exempel är den anikteriska formen av akut viral hepatit B eller C. En enzymimmunanalys för hepatit visar att en person har akut hepatit och symtom som smärta i hypokondrium, muntorrhet, värkande leder och andra ospecifika symtom blir lätt att förstå.

Efter några veckor finns dessa antikroppar i en alltmer försvinnande koncentration, vilket ger immunglobuliner av klass G. De bestäms i blodet i många månader, och till och med år, och indikerar antingen återhämtning, och sedan kan de förbli för livet och bilda stark immunitet. Detta indikerar ett kraftfullt skydd mot patogenantigener. Så det är antikroppar av denna klass som gör en person immun mot upprepade fall av mjältbrand och pest. Men det finns tillfällen då dessa antikroppar inte förhindrar deras skadliga effekter i närvaro av antigener. I det här fallet kan vi prata om en ökning av aktiviteten i en kronisk process..

När det gäller IgE, har den tillämpning vid diagnos av olika parasitiska invasioner och allergiska tillstånd, och IgD utför en hjälpfunktion: den enzymbundna immunosorbentanalysen möjliggör dess användning vid den komplexa diagnosen av astma och autoimmuna tillstånd. Naturligtvis är det mycket mer komplicerat att dechiffrera ELISA-analysen och specialister - immunologer kan berätta mycket mer. Vad är indikationerna på att en patient självständigt kan ansöka till laboratoriet för att utföra forskning?

Indikationer för analys

Först och främst måste du förstå att det inte finns någon sådan analys - ”bara blod för ELISA”. Det finns en analys för hepatit, det händer - för ureaplasma eller för syfilis. Således kan donering av blod för ELISA endast riktas genom att "beställa" sökningen efter önskad infektion. Det är bara så obegripligt varför donera blod från en ven utan att veta vad man ska leta efter. Det är därför enzymimmunanalysen är ett kraftfullt verktyg som är viktigt vid diagnostisk sökning. Endast en läkare kan ordinera denna analys, eftersom han medvetet letar efter en infektion som kännetecknas av dessa symtom. En vanlig person kan naturligtvis beställa 150 blodprover med ELISA-metoden för "alla infektioner", men detta skulle vara ett orimligt och kostsamt tillvägagångssätt för diagnos och ta tester för allt.

Det mest efterfrågade utnämningen av dessa tester för följande sjukdomar och tillstånd:

Olika mikrobiella och virusinfektioner, symtom på infektionssjukdomar - utslag, feber, gulsot, svullna lymfkörtlar, diarrésyndrom, misstänkt sexuellt överförbara sjukdomar.

ELISA-tekniken hjälper till att bestämma ureaplasma och mykoplasma, syfilis och klamydia, tuberkulos och cytomegalovirusinfektion, herpes, viral hepatit och Epstein-Barr-viruset. För närvarande kan cirka 500 olika infektioner verifieras med enzymimmunanalysen.,

Om du misstänker en helminthisk invasion och förekomsten av symtom som allergier, eosinofili i blodet, klåda, dyspepsi och viktminskning,

Läs mer om denna typ av forskning i artikeln "Blodprov för maskar och parasiter: forskningsmetoder, ELISA, till vem och hur man donerar?".

Vid upptäckt av allergener som orsakar angioödem, urtikaria, andfåddhet och astmaattacker.

I det här fallet upptäcks specifik Ig E, och det finns hela allergipaneler som hjälper till att exakt bestämma allergenet - bläckfisk eller räkor, torrfoder för fisk som innehåller dafnier, husdamm. Med hösnuva låter den här metoden dig hitta exakt spannmål, buske eller träd som orsakar vårnysningar och lakrimation.,

  • Denna metod visas vid misstankar om autoimmuna sjukdomar som behandlas av reumatologer,
  • Om tumörtillväxt och aktivitet misstänks,
  • I komplex diagnostik av immunbristtillstånd och HIV-infektion,
  • För blodsjukdomar och i transplantologi, för en omfattande bedömning av immunitet, till exempel före lever- eller njurtransplantation.

Nu vet vi varför du behöver donera blod för ELISA. Ta reda på hur denna studie genomförs.

Hur analysen görs?

Det klassiska materialet är patientens venösa blod. Men om det behövs kan du undersöka ett brett utbud av vätska och vävnad: slem, saliv, livmoderhalssekretioner, cerebrospinalvätska, glasögon i ögat, innehållet i navelsträngen och fostervatten. Det är viktigt att komma ihåg att intag av olika mediciner, överdriven fysisk aktivitet, alkoholmissbruk kan snedvrida testresultaten.

Det finns flera metoder som tillåter denna analys. Den vanligaste metoden i kliniska laboratorier är den fotometriska metoden. I det här fallet används ämnen märkta med färg, efter vilken reaktionen, och markeringen av antigen-antikroppskomplexet, deras färgförändringar. Som ett resultat ändras också den optiska densiteten hos lösningen, och denna förändring är direkt proportionell mot koncentrationen av de detekterade antikropparna. Laboratoriespektrofotometrar används framgångsrikt för att mäta dessa avvikelser.

För ELISA används också en fluorometrisk metod som baseras på fluorescens. Även här beräknas intensiteten av de fluorescerande ämnena som har lagt sig på de undersökta proverna..

Slutligen använder immunologisk analys elektrokemiska metoder för att bestämma aktiviteten hos enzymer, vilka är specifika märken för antigener och antikroppar. Enzymimmunanalysen involverar oftast användningen av enzymer såsom alkaliskt fosfatas, pepparrotsperoxidas och galaktosidas. Dessa enzymer kan binda till antikroppar eller antigener och markera dem på grund av deras aktivitet.

Nackdelar med metoden och dess fördelar

De uppenbara "plus" inkluderar den demokratiska kostnaden för analysen, möjligheten att använda screening i stora grupper av befolkningen, till exempel när man undersöker gravida kvinnor för HIV. Metoden för enzymimmunanalys är ganska specifik och kan användas för att kontrollera kvaliteten på behandlingen för många sjukdomar. Det är viktigt att analysen förbereds snabbt och är enkel och säker för patienten..

Det finns dock många fallgropar. Så om immunglobuliner inte detekteras betyder det inte 100% frånvaro av sjukdomen. I själva verket mot bakgrund av immunbrist kanske kroppen helt enkelt inte "har styrkan" att syntetisera antikroppar. Om en patient har svårt leversvikt kan levern helt enkelt inte syntetisera protein, byggstenen för antikroppar. I det här fallet kallas resultatet seronegativ, och bekräftelse av infektionen krävs med en direkt och mest avancerad forskningsmetod - PCR eller polymeraskedjereaktion. Till skillnad från enzymbunden immunosorbentanalys avslöjar inte denna metod kroppens svar på den infektiösa processen (som kan vara defekt eller helt frånvarande), med PCR bestäms det ärftliga materialet direkt, eller patogenen själv lokaliseras.

Enzymimmunanalysmetoden kan ge ett fel mot bakgrund av många kroniska sjukdomar, mot bakgrund av immunsuppressiv terapi. I helmintologi och parasitologi finns det en lag: endast upptäckt av en parasit, eller dess ägg, är ett absolut tillförlitligt sätt att ställa en diagnos. ELISA kan tillhandahålla kors- och falskt positiva metoder som svarar på många normala händelser i patientens liv.

Sammanfattningsvis måste det sägas att den enzymbundna immunosorbentanalysen är en kraftfull men hjälpprocess för laboratoriediagnos av många sjukdomar. Men under alla omständigheter bör diagnosen baseras på många faktorer: patientens klagomål och anamnes, undersökningsdata och andra diagnostiska metoder för hjälp och instrument..

Vad är ELISA-blodprov och varför är det viktigt för diagnos

Vad är ett ELISA-blodprov

Detta är ett laboratorietest som gör att du kan bestämma närvaron av specifika antikroppar (skyddsfaktorer i blodet med proteiner) mot vissa antigener (patogena medel). Bland antikroppar är immunglobuliner av största vikt, vilket kan existera i form av immunkomplex.

Immunglobuliner produceras som ett resultat av komplexa neurohumorala reaktioner av human immunitet, som uppstår som ett svar på införandet av främmande antigener. För varje typ av patogent medel produceras dess egna specifika antikroppar. De verkar genom att "binda" ett antigen eller en patologisk mikroorganism, bilda en komplex förening "antigen-antikropp" med efterföljande neutralisering, enzymatisk lysis, fagocytosreaktioner och utsöndring från kroppen.

Observera: det är genom närvaron av vissa komplex enligt ELISA-metoden som bestäms vilken typ av patogen eller det skadliga ämnet som är tillgängligt för patienten..

Du kan ta reda på de grundläggande principerna för hur mänsklig immunitet fungerar genom att titta på denna videorecension:

Immunanalys av sandwich-typ

Figur: 2. Schematisk representation av immunanalysen av "sandwich" -typ. ATp - stödantikropp, ATd - detektorantikropp, AG - antigen, M - märkning kovalent bunden till detektorantikroppen, P - substrat på vilken stödantikroppen är sorberad.

Denna variant av immunanalys (Fig. 2) använder ett par antikroppar som är specifika för rumsligt avlägsna epitoper av det studerade antigenet..

I. Sorption av antikroppsstöd

I brunnarna i en 96-brunnars platta för immunanalys adsorberas substratantikroppar 1-2 | ig per brunn i 100 | il fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Inkubationen utförs i 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell plattskakare. Tvättning (två gånger) av obundna antigenmolekyler utförs med fosfat-saltlösning innehållande 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Blockering

För att blockera platserna för icke-specifik bindning fylls plattans brunnar med PBST och inkuberas i 10-15 minuter vid rumstemperatur.

III. Antigeninkubation

Tillsätt 50 pl av testlösningen eller standardutspädningar av antigenet i plattans brunnar med föradsorberade antikroppar. Antigenutspädningar bör beredas med PBST eftersom Tween-20 reducerar ospecifik bindning av proteinmolekyler till varandra och till plattans yta. Både testlösningen och standardantigenutspädningar appliceras parvis (eller tre replikat) med användning av två (tre) brunnar för varje proteinutspädning. Inkubationen utförs vid rumstemperatur under 30 minuter under konstant omrörning. Tvättningen sker med PBST-lösning tre gånger.

IV. Inkubation med enzymbundna antikroppar

I plattans brunnar, tillsätt 100 pl av en lösning av specifika antikroppar konjugerade med ett enzymmärke. Den optimala koncentrationen av konjugerade antikroppar anges vanligtvis av tillverkaren (vanligtvis används en koncentration på 2-4 μg / ml). Inkubation med enzymmärkta antikroppar utförs i 30 minuter vid rumstemperatur och skakas på en horisontell plattskakare. Tvättningen utförs med PBST 5-6 gånger.

V. Genomföra en enzymatisk reaktion, åtföljd av utseendet på en färgad produkt

Tillsätt 100 pl substratlösning till brunnarna och inkubera i 10 minuter vid rumstemperatur och konstant omrörning.

Vi. Avbryta en enzymatisk reaktion

Innan mätningen av den optiska densiteten stoppas färgreaktionen med 0,5 M H2SO4. Efter inkubering tillsätts 50 | il av en lösning av 0,5 M svavelsyra till brunnarna med OPD-arbetslösningen. Därefter kan du omedelbart börja mäta den optiska densiteten.

Vii. Mätning av optisk densitet

Den optiska densiteten för lösningen av den färgade produkten mäts vid A = 490 nm med användning av en plattspektrofotometer.

tryckversion

Vad är immunglobuliner

Öppet och studerade 5 huvudklasser av immunglobuliner - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. resten är ännu inte helt förstådd och den befinner sig i vetenskaplig forskning.

Observera: det viktigaste inom praktisk medicin är immunglobuliner i klasserna A, M och G. Det informativa värdet av definitionen baseras på olika tidsintervall för deras utseende, maximala och försvinnande.

Låt oss överväga denna fråga mer detaljerat..

Huvuduppgiften för immunglobulin A (IgA) är skyddsfunktionerna i luftvägarnas slemhinnor, mag-tarmkanalen och urinvägarna. Med en akut uppkomst av sjukdomen är det omöjligt att identifiera dem. Dessa skyddskomplex uppträder först från 2 veckor efter sjukdomens uppkomst, ibland senare. Huvuddelen av immunglobulin A koncentreras i slemvävnader. Cirka 80%. Resten av antikropparna cirkulerar i blodet. Huvudfunktionen är att neutralisera och förstöra mikroorganismer. Efter att de akuta manifestationerna av sjukdomen har avtagit börjar mängden av dessa immunglobuliner minska och försvinner helt i upp till 8 veckor efter sjukdomens uppkomst. Om IgA upptäcks vid ett senare datum, indikerar detta processens kronisering.

De viktigaste och första markörerna för den akuta fasen av utvecklingspatologin är immunglobuliner av klass M (IgM). De finns på den 5: e dagen efter sjukdomens början. Deras närvaro i blodet kan bestämmas i cirka 6 veckor. Sedan börjar de blekna snabbt.

Det återstående immunsvaret kännetecknas av närvaron av klass G-immunglobuliner (IgG) i blodet. Utseendet av dessa faktorer i blodet upptäcks ungefär en månad efter sjukdomens uppkomst. I framtiden kan de bestämmas i många månader, år och till och med hela livet, genom att utföra en skyddande funktion mot sjukdomens återkomst (återfall) och i vissa fall göra det omöjligt för sekundär utveckling av patologi. Om mängden immunglobulin G börjar öka igen kan återinfektion misstänks. En liknande slutsats kan göras genom att utföra två till tre tester med ett intervall på två veckor..

Immunglobulin E (IgE) används i praktiken av parasitologi.

Immunglobulin D (IgD) ligger på B-lymfocyter och finns i låga koncentrationer hos friska människor. Efter tio års liv når den sina maximala värden. Mängden immunglobulin D ökar under graviditet hos patienter med systemiska bindvävssjukdomar, bronkialastma, sjukdomar orsakade av ett immundefekttillstånd.

Kontraindikationer

Inga kardinala kontraindikationer för enzymimmunanalysen har identifierats. Ibland under graviditeten, när patienten har en kontinuerlig förändring av hormoner i blodet, kan det vara nödvändigt att utföra analysen flera gånger för att få ett mer tillförlitligt resultat. Diagnosmetoden rekommenderas inte för användning efter:

  • kirurgiska ingrepp;
  • hemolys (förstörelse av röda blodkroppar);
  • blodtransfusion;
  • ta en punktering eller biopsi av biologiskt material.

Indikationer för utnämning av en enzymbunden immunosorbentanalys

Bestämning av antikroppar mot förekomsten i kroppen av patogena mikrober som orsakar:

  • syfilis;
  • trichomoniasis;
  • ureaplasmos och mykoplasmos.

Det finns en ökning av mängden immunglobuliner och med helminthiska invasioner.

Diagnostik utförs för att upptäcka:

  • herpes sjukdomar;
  • grupper av viral hepatit;
  • Epstein-Barr-virus;
  • cytomegalovirus.

Med hjälp av ELISA kan du bestämma närvaron av antikroppar mot 600 typer av allergener, upptäcka tillståndet av immunbrist, genomföra en omfattande undersökning före transplantation, genomföra en omfattande analys för effektiviteten av behandlingen.

ELISA är en ytterligare metod för att detektera cancerceller.

Träning

Principen för denna typ av blodprov är baserad på bildandet av specifika antikroppar i människokroppen när antigener tränger in i det, det vill säga främmande medel som orsakar utvecklingen av en viss sjukdom. Som ett resultat av deras interaktion bildas komplex "antigen - antikropp", som utsätts för forskning i genomförandet av enzymimmunanalys.

För att inte påverka dessa komplex och följaktligen tillförlitligheten för de erhållna resultaten kräver analys av blod och annat biologiskt material för ELISA en viss förberedelse..

Blod doneras på fastande mage, också 14 dagar före den avsedda undersökningen, specifik behandling avbryts och användningen av antibakteriella, antivirala läkemedel stoppas.

Blod för ELISA doneras från en ven. Omedelbart innan du tar blod bör du begränsa fysisk aktivitet såväl som att inte röka och dricka alkohol.

Hur utförs ELISA i blodet?


För enzymimmunanalys används i de flesta fall patienternas blod, ibland tas vävnaden i glaskroppen, vätskan i ryggraden, fostervattnet.

Blod dras genom en injektionsnål i en spruta från kubitalvenen. Studien utförs på fastande mage. Man bör komma ihåg att intag av vissa mediciner kan påverka testresultatet. Innan du donerar blod måste du avstå från att röka, dricka alkohol. Droganvändning kan snedvrida resultaten.

När det gäller negativa värden för immunglobuliner IgM, IgG, IgA, kan vi prata om frånvaron av sjukdomen eller dess initiala fas, och ett resultat med minus är möjligt med full återhämtning efter en betydande tid.

Om IgA och IgM inte detekteras och IgG manifesterar sig positivt, så pratar vi troligen om den bildade immuniteten efter en smittsam sjukdom eller efter vaccination.


När det gäller en hög titer av IgM med negativa värden av IgG, IgA, kan man dra slutsatsen att det finns en akut infektionssjukdom.

Samtidiga positiva värden för resultaten av immunglobuliner - IgA, IgM, IgG är karakteristiska för den akuta fasen av återfall av den befintliga kroniska sjukdomen.

För en kronisk infektion i fasen av processen som avtar (remission) visar ELISA negativa värden för immunglobulin M (IgM), medan resultatet av immunglobuliner G (IgG) och A (IgA) kommer att vara positivt.

Reagenssatser

Satser för enzymimmunanalys produceras av olika tillverkare, i olika konfigurationer. Det är erkänt i Ryssland. Denna tillverkare producerar uppsättningar reagenser för studien med ELISA-metoden för nästan alla infektioner som är vanliga i våra breddgrader som kan analyseras på detta sätt. Förutom själva reagensen innehåller satserna ytterligare material som säkerställer säkerhet, bekvämlighet och snabb analys. Dessutom färgas kemiska ämnen i olika färger, vilket minskar sannolikheten för misstag i valet av ett reagens av en laboratorieassistent..

Kemiska och biologiska kit skiljer sig åt i relativ tillgänglighet, vilket direkt påverkar distributionen och tillgängligheten av enzymimmunanalys för befolkningen.

Fördelar med enzymimmunanalysmetoden

De viktigaste fördelarna med ELISA-metoden är:

  • låga kostnader för analys;
  • diagnostisk specificitet, noggrannhet;
  • dynamisk kontroll (upprepad analys för att bestämma effektiviteten av behandlingen och stadierna av sjukdomen);
  • möjligheten att genomföra massundersökningar i infektionsfokuserna;
  • hastigheten för att få resultatet;
  • relativ enkel analys;
  • möjligheten att använda informationsteknik vid bearbetning;
  • säkerhet och smärtfrihet för patienten.

När utse

ELISA-metoden anses vara en av de mest exakta diagnostiska metoderna, dess tillförlitlighet är mer än 90%. Analysen används för att identifiera olika allvarliga sjukdomar och farliga tillstånd..

Vilka patologier kan identifieras:

  • viral hepatit;
  • HIV;
  • cytomegalovirusinfektion;
  • herpetisk patologi;
  • mononukleos;
  • toxoplasmos;
  • röda hund, mässling
  • vissa typer av parasitos;
  • patologier orsakade av Helicobacter pylori;
  • onkologiska sjukdomar;
  • allergiska reaktioner;
  • hormonella störningar
  • problem i reproduktionssystemets arbete;
  • autoimmuna patologier;
  • utvecklingsstörningar, fosterskador.

En enzymbunden immunosorbentanalys under graviditeten gör att du kan bedöma risken för att utveckla vissa patologier i njurarna, hjärtat, blodkärlen.

Diagnos görs för att övervaka nivån av antikroppar som kan orsaka allvarliga neurologiska störningar hos ett barn.

Immunanalys blodprov i parasitologi


Möjligheten att använda ELISA vid diagnos av parasitiska sjukdomar bestäms av specifikt immunglobulin E (IgE), som tenderar att öka i denna grupp av sjukdomar. Dessutom är immunglobulin E en markör för atopiska reaktioner associerade med allergiska processer. Det finns i små mängder i blodet. Dess huvudsakliga lokalisering är slemhinnor, basofiler och marcophages. Huvudfunktionen för detta proteinkomplex är att skydda kroppens slemhinnor. Men samtidigt deltar han i immunsvar riktade mot parasiter. Eosinofiler och makrofager "hanterar" IgE-aktivering. Detta är ett viktigt faktum för att jämföra analysdata när diagnosen av sjukdomen fastställs..

ELISA används för att upptäcka:

  • runda helminths (ascaris, pinworms);
  • akuta och kroniska former av opisthorchiasis;
  • trikinos;
  • närvaron av lamblia (som en ytterligare analys);
  • former av leishmaniasis;
  • amoebiasis;
  • toxoplasmainnehåll;

Viktigt: immunglobuliner produceras i kroppen som antikroppar mot vissa antigener. Därför, även med analysens högsta specificitet, exkluderas inte fel i noggrannhet. Vid parasitiska sjukdomar är sannolikhetsprocenten cirka 90%.

Sammanfattningsvis bör det noteras att modern immunologi ständigt utvecklas och letar efter nya metoder för diagnos och behandling av sjukdomar..

Stepanenko Vladimir, kirurg

67 totalt idag

(54 röster, genomsnitt: 4,17 av 5)

Liknande inlägg
Lipidblodprov
Blodprov för kreatinin: normer, avkodning, hur man donerar

Lite om proteinernas skyddande roll i människokroppen

Efter infektion ändrar humana antikroppar sin koncentration i blodet, beroende på sjukdomsstadiet. Det är studier av kvantiteten och kvaliteten på antikroppar som hjälper till att avgöra om denna fas är akut eller kronisk och hur effektivt kroppen klarar av främmande flora..

ELISA-analysen är effektiv i studien av hormonella störningar, definitionen av cancer och immunsjukdomar. Det kan i de tidiga stadierna upptäcka allvarliga sjukdomar som hepatit B och syfilis, HIV-infektion, liksom ett antal virus som inte manifesterar sig på något sätt, till exempel cytomegalovirus.

För-och nackdelar

Enzymimmunanalystypen har ett antal fördelar jämfört med andra undersökningsmetoder:

  1. Hög känslighet (upp till 90%)
  2. Rimligt pris på diagnostiska kit.
  3. Stabilitet samtidigt som alla ingredienser sparas för testet (över ett år);
  4. Möjlighet att upptäcka infektion i första steget.
  5. Bekvämlighet och effektivitet i forskningen.
  6. Lämplighet för massundersökningar.
  7. Enande.
  8. Möjlighet att använda den minsta mängden diagnostiserat material.
  9. Enkel att spåra dynamiken i patologin av smittsam natur.
  10. Tillgänglighet (idag utförs enzymimmunanalys på alla sjukhus och kliniker)
  11. Automatisering av reaktionssteg.

Bland studiens brister är:

  • Det upptäcker inte det orsakande medlet för själva sjukdomen utan kroppens immunsvar mot patogenens penetration i den.
  • Möjligheten att få ett falskt positivt (falskt negativt) resultat på grund av att man tar vissa mediciner, tekniska brister, nedsatt ämnesomsättning, förekomsten av flera kroniska sjukdomar.

Möjligheter för tekniken

Användningsområdet för blodprovet för ELISA är ganska brett - för närvarande är det omöjligt att föreställa sig hur komplicerad sökandet efter orsaken till många sjukdomar skulle vara. Sådan forskning används nu i nästan alla medicinska områden, även inom onkologi. Även om det är svårt för oinformerade att förstå, i vissa fall, efter att ha utfört det, var det möjligt att rädda patienternas liv, efter att ha upptäckt en tumör i de tidiga stadierna..

Viktig! ELISA - ett blodprov som visar markörer som är karakteristiska för vissa maligna processer, vilket gör att du kan upptäcka sjukdomen vid det tillfället när det är utanför någon annan metods kontroll..

I moderna diagnostiska centra representeras laboratorieundersökningar inte bara av tumörmarkörer - de är utrustade med en imponerande arsenal av paneler för att utföra denna diagnos. Med deras hjälp är det möjligt att bestämma många patologiska tillstånd, såsom hormonella abnormiteter och infektiösa processer av olika ursprung..

Dessutom kommer genomförande och avkodning av ett ELISA-blodprov att göra det möjligt att spåra effekten av läkemedel på kroppen hos en sjuk person och till och med ett djur. Det senare används i stor utsträckning i veterinärkliniker, vilket hjälper till att bibehålla hälsan hos våra husdjur eller försörjare, vilket ger en stabil leverans av kött, mejeriprodukter och ägg som inte kan ersättas i kosten..

Så, som ett resultat av att endast ta några milliliter venöst blod och dess diagnos med ELISA-metoden, kommer läkaren, efter att ha beskrivit forskningsmaterialet, att kunna bestämma:

  • hormonellt tillstånd, inklusive biologiskt aktiva substanser i könsorganen och sköldkörteln, såväl som binjurarna;
  • förekomsten av bakterie- och virusinfektioner (hepatit B och C, syfilis, herpes, klamydia, tuberkulos, myko- och ureaplasmos, HIV, TORCH) och andra sjukdomar av denna art;
  • tecken på vital aktivitet hos patogener i den patologiska processen, som slutade i återhämtning och passerade in i antikroppsbildningsstadiet (immunsvar).

Sådana komplex är mycket lättare att känna igen och eliminera av immunceller. Återstående effekter i form av antikroppar finns i flera fall i blodet för livet, vilket praktiskt taget minskar riskerna för återinfektion till noll.

En enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter och andra mikroorganismer - skadedjur av kroppens hälsa gör det möjligt att inte bara fastställa förekomsten av patogener utan också berätta om deras antal i patientens blodplasma. Således möjliggör en sådan studie både kvalitativ och kvantitativ analys av patogena mikroorganismer som finns i serumet..

Patogenens koncentrationsnivå påverkar signifikant utvecklingen av infektion och återhämtningshastigheten, därför anses en kvalitativ bedömning inte vara mindre viktig än en kvantitativ. Hon ges långt ifrån den sista rollen i behandlingen av barn och vuxna. Men hur kan det hända att ELISA kan känna igen ett så stort antal mikroorganismer som parasiterar människors och djurs kropp, orsakar skada och minskar livskvaliteten??

Forskningsmetoden bygger på flera alternativ (direkt och indirekt - konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig) för att utföra de tilldelade uppgifterna, som alla är avsedda för specifika ändamål. Detta tillvägagångssätt möjliggör en riktad sökning och så snart som möjligt att identifiera orsaken till en viss patologi..

När det kommer in i brunnen med blodplasma identifierar antigener eller antikroppar föremålet i samband med deras orientering och bildar ett komplex (AG - AT). Denna bildning fixeras av en enzymatisk förening (konjugat), som därefter kommer att manifestera sig som en förändrad färgning av brunnen. ELISA produceras på specifika testsystem tillverkade i specialiserade laboratorier och utrustade med en komplett uppsättning reagenser.

Denna analys kan utföras på brickor - brickor och spektrofotometeravläsningar, men de kräver manuellt arbete. Naturligtvis är det flera gånger bekvämare och snabbare för en laboratorieassistent att utföra alla manipulationer på helt automatiserade enheter. Vid användning av dem frigörs laboratoriepersonal från en stor mängd monoton aktivitet - tvätt, instillning och resten av rutinen, men inte alla medicinska institutioner har råd med så dyr utrustning

Därför fortsätter många sjukhus och diagnostiska institutioner att utföra ELISA på gammaldags sätt - på halvautomatiska enheter..

Tolkning av forskningsmaterial är uteslutande kompetensen hos en laboratoriediagnostiker - bara han kan få veta resultaten om detaljerna och finesserna i sjukdomsförloppet. I detta fall måste läkaren ta hänsyn till möjligheten att få falska negativa eller falska positiva svar..

Resultaten av ELISA-analysen är baserade på att erhålla kemiska reaktioner på enzymer som fungerar som speciella identifieringsmärken för att känna igen antikroppar. Därför börjar antikroppar interagera med vissa antigener under immunokemiska reaktioner. Allt detta ger anledning att hävda att falska resultat när man donerar blod för ELISA är minimala..

Studien låter dig bestämma antalet immunceller, deras egenskaper samt närvaron av nödvändiga antikroppar

Ett positivt resultat beaktas när en färg på lösningen detekteras. Färgen signalerar att antigener interagerar med antikroppen. Om inget sådant händer är resultatet negativt..

Det finns flera tekniker och metoder för enzymimmunanalys: direkt och indirekt, konkurrenskraftig och blockerande.

Kärnan i undersökningen av blod (något annat biologiskt material) på ELISA är en algoritm som består i genomförandet av två reaktioner - immun och enzymatisk.

Under det första binder patologiska medel till de skyddande elementen i cellerna i det biologiska materialet som tas för forskning. Ett antigen-antikropp-immunkomplex bildas. Det ser ut så här. Antigener finns på ytan av absolut alla celler.

DETALJER: Blod på klamydia-transkript

När främmande celler kommer in i kroppen fångas de upp av immunceller (på vars ytor antikroppar finns), som jämför data om antigener från ytan på de nyanlända cellerna med informationen lagrad i deras eget "minne". Om dessa data inte stämmer överens, aktiveras kroppens skyddsfunktioner, vilket består i bildandet av ett immunkomplex.

Därefter utförs en enzymatisk reaktion som visualiserar resultaten av den tidigare reaktionen. Dess princip bygger på omvandlingen av ett ämne från ett till ett annat. För varje typ av ELISA-material som bildas under immunreaktionen finns det ett visst enzym, vars behandling används för att bestämma koncentrationen av ett främmande medel (beroende på färgens intensitet i lösningen).

ELISA - enzymbunden immunosorbentanalys: transkript

Inskickat av: Parazitolog i Diagnostics 16 februari 2019

Den diagnostiska metoden (ELISA) är informativ och inte för dyr, därför erbjuder många laboratorier sina kunder denna metod (enzymbunden immunosorbentanalys). Studien utförs på fastande mage, blod för analys tas från patientens kubital ven. Det är tillrådligt att inte röka eller dricka alkohol före ELISA.

Vad är ett ELISA-blodprov

Bland metoderna för blodanalys, som gör det möjligt att bedöma kroppens förmåga att motstå smittsamma sjukdomar och visa sjukdomsfasen, intar enzymlänkad immunosorbentanalys (ELISA) en viktig plats. Denna studie gör det möjligt att fullständigt bedöma aktiviteten för blodets skyddande funktion och identifiera tillståndet för immunbrist i infektiösa patologier, liksom blodsjukdomar, autoimmuna processer, hormonella problem.

Detta är ett laboratorietest som gör att du kan bestämma närvaron av specifika antikroppar (skyddsfaktorer i blodet med proteiner) mot vissa antigener (patogena medel). Bland antikroppar är immunglobuliner av största vikt, vilket kan existera i form av immunkomplex.

Immunglobuliner produceras som ett resultat av komplexa neurohumorala reaktioner av human immunitet, som uppstår som ett svar på införandet av främmande antigener. För varje typ av patogent medel produceras dess egna specifika antikroppar. De verkar genom att "binda" ett antigen eller en patologisk mikroorganism, bilda en komplex förening "antigen-antikropp" med efterföljande neutralisering, enzymatisk lysis, fagocytosreaktioner och tillbakadragande från kroppen. Det är genom närvaron av vissa komplex som ELISA-metoden bestämmer typen av patogen eller ett skadligt ämne närvarande.

Det är värt att komma ihåg att efter avslutad behandling kan antikroppar förbli i vår kropp under mycket lång tid, även efter att infektionen har lämnat vår kropp, dvs. det så kallade "serologiska ärret" finns kvar. Det finns till exempel tusentals stjärnor på natthimlen. Många av dessa stjärnor har för länge sedan dött, men deras ljus har lyst fram till nu, i århundraden. Faktum är att vi bara ser spåren efter en stjärna. Det finns ljus, men stjärnorna är borta under lång tid.

Men om det inte finns något ljus betyder det inte att stjärnan inte var där. Det är samma sak med antikroppar. Deras närvaro garanterar inte närvaron av det önskade smittämnet i kroppen. Frånvaron av antikroppar betyder inte att det inte finns någon infektion. Om resultatet av ELISA-analysen är positivt betyder det att du måste leta efter en infektion med mer specifika och dyra metoder - PCR, bakteriologiska kulturer. Ett falskt positivt resultat är möjligt om flera mikrober har en liknande antigenstruktur, då kommer "liknande" antikroppar att produceras till olika mikrober.

Vad är immunglobuliner

Öppet och studerade 5 huvudklasser av immunglobuliner - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. resten är ännu inte helt förstådd och den befinner sig i vetenskaplig forskning.

Huvuduppgiften för immunglobulin A (IgA) är skyddsfunktionerna i luftvägarnas slemhinnor, mag-tarmkanalen och urinvägarna. Med en akut uppkomst av sjukdomen är det omöjligt att identifiera dem. Dessa skyddskomplex uppträder först från 2 veckor efter sjukdomens uppkomst, ibland senare. Huvuddelen av immunglobulin A koncentreras i slemvävnader. Cirka 80%. Resten av antikropparna cirkulerar i blodet.

De viktigaste och första markörerna för den akuta fasen av utvecklingspatologin är immunglobuliner av klass M (IgM). De finns på den 5: e dagen efter sjukdomens början. Deras närvaro i blodet kan bestämmas i cirka 6 veckor. Sedan börjar de blekna snabbt.

Det återstående immunsvaret kännetecknas av närvaron av klass G-immunglobuliner (IgG) i blodet. Utseendet av dessa faktorer i blodet upptäcks ungefär en månad efter sjukdomens uppkomst. I framtiden kan de bestämmas i många månader, år och till och med hela livet, genom att utföra en skyddande funktion mot sjukdomens återkomst (återfall) och i vissa fall göra det omöjligt för sekundär utveckling av patologi.

Om mängden immunglobulin G börjar öka igen kan återinfektion misstänks. En liknande slutsats kan göras genom att utföra två till tre tester med ett intervall på två veckor..

Immunoglobulin E (IgE) används vid parasitologi. Immunoglobulin D (IgD) ligger på B-lymfocyter och finns i låga koncentrationer hos friska människor. Efter tio års liv når den sina maximala värden. Mängden immunglobulin D ökar under graviditet hos patienter med systemiska bindvävssjukdomar, bronkialastma, sjukdomar orsakade av ett immundefekttillstånd.

Hur utförs ELISA i blodet?

För enzymimmunanalys används i de flesta fall patienternas blod, ibland tas vävnaden i glaskroppen, vätskan i ryggraden, fostervattnet.

När det gäller negativa värden för immunglobuliner IgM, IgG, IgA, kan vi prata om frånvaron av sjukdomen eller dess initiala fas, och ett resultat med minus är möjligt med full återhämtning efter en betydande tid.

Om IgA och IgM inte detekteras och IgG manifesterar sig positivt, så pratar vi troligen om den bildade immuniteten efter en smittsam sjukdom eller efter vaccination.

Om IgA och IgM inte detekteras och IgG manifesterar sig positivt, så pratar vi troligen om den bildade immuniteten efter en smittsam sjukdom eller efter vaccination

När det gäller en hög titer av IgM med negativa värden av IgG, IgA, kan man dra slutsatsen att det finns en akut infektionssjukdom.

Samtidiga positiva värden för resultaten av immunglobuliner - IgA, IgM, IgG är karakteristiska för den akuta fasen av återfall av den befintliga kroniska sjukdomen.

För en kronisk infektion i fasen av processen som avtar (remission) visar ELISA negativa värden för immunglobulin M (IgM), medan resultatet av immunglobuliner G (IgG) och A (IgA) kommer att vara positivt.

Immunanalys för parasiter av ELISA

ELISA är en förkortning för enzymbunden immunosorbentanalys för parasiter. Det innebär medicinsk testning av en persons immunsystem. Testet baseras på antikropparnas förmåga att ändra färg. Denna diagnostiska metod har många positiva egenskaper. Till exempel kan han upptäcka ett stort antal sjukdomar orsakade av infektion. Det är mest effektivt i fall av sjukdomar orsakade av parasitära organismer..

Vad den presenterade tekniken ger: bestämning av närvaron av helminter i blodet; letar efter andra patogener i kroppen; du kan ta reda på orsakerna till att din hälsa försämras; behandlingen baseras också på analyser som erhållits på detta sätt; du kan övervaka tillståndet i ditt immunsystem.

En annan bra egenskap är förmågan att spåra cancermarkörer, oavsett ursprung, men naturligtvis beroende av deras närvaro i kroppen. Detta test är också lämpligt för att beskriva tillståndet för det mänskliga reproduktionssystemet. Närvaron av vissa proteiner, hormoner och peptider gör det möjligt för oss att bedöma partnerns potential när det gäller att bli barn, liksom den uppskattade kvaliteten på det framtida fostret.

Ett blodprov för Giardia är en ganska populär praxis bland moderna läkare. Dessutom är denna forskningsmetod ett utmärkt verktyg för biomedicinsk analys och kvantitativ statistik när det gäller specifika antigener..

Hur används ELISA-metoden?

Det skulle vara ett stort misstag att förväxla ELISA-metoden med metoden för sondering och efterföljande avföring av avföring. De senare utförs med metoder på mikroskopisk nivå när ett avföringsprov som ges av en patient tas eller om det tas från en potentiell patient direkt i en medicinsk institution. I provet försöker de upptäcka helminthiska invasioner och andra komponenter, på ett eller annat sätt associerat med parasiternas vitala aktivitet. Inte bara mikroskopiska parasitorganismer studeras utan också deras rester, deras ägg och larver.

Det är sant att detta är mer komplexa fall, så kvaliteten på en sådan analys beror i hög grad på att laboratoriets arbetare utför testet. Funktioner i tekniken och dess skillnad från gammal laboratorieforskning:

  • nu används istället för avföringsprov blod för att bestämma närvaron av helminter;
  • studien av provet utförs i laboratoriet mycket snabbt, nästa dag kan du få fullständig information;
  • kostnaden för laboratorieforskning är billig, eftersom teologi är mycket enkel;
  • ett blodprov för helminter ger hög noggrannhet.

Testresultatens relevans och trovärdighet är direkt proportionell mot kvalifikationerna för medicinsk personal, laboratoriets tekniska utrustning samt frånvaron av oaktsamhet eller ouppmärksamhet bland läkare. Men även den mest uppmärksamma och ansvarsfulla laboratorieassistenten kommer att uppleva enorma svårigheter om parasiten finns i kroppen i sin minimala population, eller om kopplingen utfördes omedelbart vid tidpunkten för testningen..

Immunologisk analys av blod med ELISA

Få människor vet vad blodprover är från det humana immunologiska systemet, eftersom dessa tester inte är så vanliga. Som regel ger ett sådant blodprov information om immunbristviruset i människokroppen och är anonymt, eftersom det utförs på begäran av patienten..

I grund och botten, för ELISA-analys, är det biologiska materialet som studeras blod, emellertid cerebrospinalvätska, innehållet i glaskroppen, fostervätska etc..

För provtagning används blod som tas från en ven på fastande mage, från vilket serum erhålls för forskning genom centrifugering. Dessutom kan studien av blodserum avslöja ett antal sexuellt överförbara sjukdomar (syfilis, herpes, klamydia), liksom alla typer av hepatit, mässling, röda hund, påssjuka och toxoplasmos..

I grund och botten, för ELISA-analys, är det biologiska materialet som studeras blod, emellertid cerebrospinalvätska, innehållet i glaskroppen, fostervätska etc..

Immunglobuliner är immunmolekyler som kan binda till och neutralisera de flesta smittsamma patogener och toxiner i kroppen. I detta fall är immunoglobulins viktigaste kännetecken deras specificitet, det vill säga förmågan att binda till ett specifikt antigen. Det är denna egenskap som används för att genomföra ett blodprov för immunglobulin..

Det finns fem typer av immunglobuliner, men de mest studerade är immunglobuliner A, M och G. Immunglobuliner M och G är aktiva i blodet. Immunglobuliner A är en slags barriär på ytan av slemhinnorna, eftersom de finns där i stora mängder.

Immunologiskt blodprov gör att du kan bestämma typen av immunglobuliner, tack vare denna ELISA kan du inte bara diagnostisera sjukdomen utan också bestämma stadiet för detta och spåra sjukdomens dynamik:

  • under de första två veckorna av sjukdomen finns endast immunglobuliner A;
  • från 2: a till 3: e veckan av sjukdomen finns immunglobuliner A och M i blodet;
  • CC3 under 4 veckor bestäms ett blodprov för immunglobulin av alla tre typerna;
  • under återhämtning försvinner immunglobuliner M i blodet och mängden A och G minskar 2 till 4 gånger;
  • i närvaro av en kronisk process är immunglobuliner G nödvändigtvis närvarande i blodet, immunglobuliner M är frånvarande, immunglobuliner A kan vara närvarande eller frånvarande.

Omfattning av immunologiskt blodprov med ELISA

  • Diagnostik av virussjukdomar: hepatit, herpes, Epstein-Barr-virus, cytomegalovirus etc.
  • sexuellt överförbara infektioner: klamydia, gonorré, Trichomonas, mycoplasma, ureaplasma;
  • syfilis; endokrinologi (bestämning av hormonnivåer);
  • tumörmarkörer (diagnostik av onkologiska sjukdomar); immunologi (diagnostik av immunbrist);
  • allergologi (diagnos och behandling av allergier).

Serologiskt blodprov är en laboratorieblodtestmetod som används för att diagnostisera smittsamma sjukdomar och bestämma stadiet för den smittsamma processen. Serologisk reaktion baseras på interaktionen mellan antikroppar och antigener.

Bestämning av antigener används för att bestämma släktet och arten av mikroorganismer. Denna forskningsmetod används i urologi och venereologi. Blod för serologiskt blodprov tas på morgonen på fastande mage från en ven.

Indikationer för utnämning och detekterbara sjukdomar med ELISA-metoden

Det huvudsakliga biomaterialet för ELISA är blodserum: i laboratoriet tas ett blodprov från patienten från en ven, från vilken de formade elementen som komplicerar analysen därefter tas bort. I vissa andra fall använder cerebrospinalvätska, fostervätska, utstryk av slemhinnor etc..

För att undvika snedvridning av resultaten rekommenderas att donera blod på fastande mage och två veckor före studien (om målet är att diagnostisera kroniska, latenta infektionssjukdomar) är det nödvändigt att sluta ta antibiotika och antivirala läkemedel. Det är omöjligt att täcka hela listan med indikationer för ELISA..

De vanligaste analysmålen är:

  • diagnostik av akuta och kroniska infektionssjukdomar: IgM och IgG mot viral hepatit A, B, C, E, liksom hepatit B- och C-antigener; IgG till HIV; Ig M och IgG till cytomegalovirusinfektion; Ig M och IgG till Epstein-Barr-virus; Ig M och IgG till herpesinfektioner; Ig M och IgG till toxoplasmos;
  • Ig M och IgG mot mässling, röda hund, salmonellos, dysenteri, fästburen encefalit och andra sjukdomar; IgG till parasitiska sjukdomar; Ig M och IgG till sexuellt överförbara infektioner; IgG till Helicobacter pylori-infektion. Allmän bedömning av indikatorer för human immunitet och markörer för vissa autoimmuna sjukdomar. Identifiering av onkologiska markörer (tumörnekrosfaktor, prostataspecifikt antigen, cancerembryonalt antigen och andra). Bestämning av innehållet av hormoner i blodserumet (progesteron, prolaktin, testosteron, sköldkörtelstimulerande hormon och andra).

Fördelar med ELISA-metoden

De obestridliga fördelarna med ELISA är metodens höga känslighet och specificitet. Känslighet är förmågan att känna igen målsubstansen, även om dess koncentration i provet är låg. Specificitet, å andra sidan, innebär diagnosens noggrannhet: om resultatet är positivt betyder det att exakt antikroppen eller antigenet som antogs hittades och inte några andra.

ELISA har till stor del ersatt mikrobiologins "guldstandard" - en bakteriologisk diagnostisk metod, under vilken, för att identifiera patogenen, var det nödvändigt att isolera den från kroppen och sedan odla kulturen på ett näringsmedium i ett provrör i flera dagar..

Hela tiden, medan analysen genomfördes, tvingades läkarna behandla patienten "blindt" och gissade om mikroorganismens ursprung genom sjukdomens symtom. Bestämning av IgM med ELISA gör att du kan göra en korrekt diagnos redan under de första dagarna av sjukdomen.

Den höga tillverkningsgraden hos enzymimmunanalysen minimerar påverkan av den mänskliga faktorn, vilket minskar sannolikheten för fel. De flesta ELISA-testkit och reagens som används i moderna laboratorier tillverkas i en industriell miljö, vilket garanterar ett exakt resultat.

Nackdelar med ELISA-metoden

Tyvärr, för att utföra ELISA, måste du veta vad du ska leta efter: analysmetoden innebär att läkaren i förväg har ett antagande om sjukdomens natur. Därför är det ingen mening att ordinera ett sådant test i hopp om att av misstag "gissa" diagnosen.

Vid diagnos av infektionssjukdomar kan enzymimmunanalysen inte hitta patogenen och bestämma dess specifika egenskaper: det indikerar bara närvaron av antikroppar i patientens blod, vilket indirekt indikerar närvaron av en främmande mikroorganism i människokroppen. ELISA är en extremt noggrann men inte billig metod, så du måste använda den klokt, och en kvalificerad läkare bör tolka resultaten.

Möjliga ELISA-resultat

Beroende på analysens innehåll kan formuläret innehålla data i form av en tabell som listar alla antikroppar eller antigener markerade med en negativ eller positiv reaktion, eller det kvantitativa värdet av resultatet (negativt, svagt positivt, positivt eller skarpt positivt) kommer att anges..

Idag produceras tusentals typer av ELISA-testsystem som gör det möjligt att detektera specifika antikroppar och antigener för en mängd olika patologier. Därför används denna analys i nästan alla medicinska industrier. Diagnosen som ställs med hjälp av ELISA är en garanti för utnämning av adekvat terapi och effektiv behandling av sjukdomen..

Om du har nödvändiga reagenser och en bra organisation av laboratoriet, kommer du att få testresultatet inom 1-2 dagar efter blodinsamling. I vissa fall, om en nödåtgärd krävs, kan denna period minskas till 2-3 timmar.

Resultatet av en högkvalitativ ELISA kommer att vara en entydig dom: det önskade ämnet finns antingen eller inte i provet. Om vi ​​talar om kvantitativ analys kan koncentrationen uttryckas som ett numeriskt värde eller ett visst antal "+" -tecken (från ett till flera).